Cours 1- méthodes d'étude de la biocell

Ordres de grandeur de la biocell

AtomeRibosomeBactérie ou mitochondrieCellule eucaryote

Taille atome

0,2 nm = 2Angström(s) = 2A

Taille Ribosome

20 nm

Taille bactérie ou mitochondire

2 µm

Taille cellule eucaryote

20 µm à 100 µm

Types de microscopes optique (ou photoniques)

Lumière directeContraste de phaseFluorescence

Microscopie en lumière directe (fonctionnement)

Absorption de certaines longueurs d'onde de la lumière:

Microscopie à contraste de phase (fonctionnement)

absorption de certaines longueurs d'onde de la lumière avec DÉPHASAGE des différents rayons lumineux

Microscopie à fluorescence (fonctionnement)

Emission de la lumière à une autre longueur d'onde que celle d'origine Utilisation d'un fluorochrome (qui rend fluorescent la structure de l'échantillon)

Microscopie en lumière directe (nécéssaire pour la réalisation)

Colorants Source lumineuse : photons

Microscopie à contraste de phase (particularité)

Adapté à l'étude des cultures cellulaires (vivants)

Microscopie à contraste de phase (comment ça marche?)

Différent indice de réfraction / structure biologiqueDéphasage = différents niveaux de gris

Microscopie à fluorescence (particularité)

Permet l'isolement de la longueur d'onde qui excite la préparation Possible d'associer plusieurs fluorophores (jusqu'a 5-6)

Limites de la microscopie optique ou photonique

Sans coloration : cellules transparentes / incolores TailleRésolution

Microscopie confocale avantages

Tranche optique de l'echantillonImage 3D

Microscope électronique avantage

Meilleure résolution

Microscope électronique (techniques)

À transmission (MET)À balayage (MEB)

Microscopie électronique à transmission (MET) (fonctionnement)

Faisceau d'électrons traverse l'échantillon Observation de petits constituants (expl: organites cellulaires)

Microscopie électronique à balayage (MEB) (fonctionnement)

Faisceau d'électrons balaye la surface de l'échantillon Observation du spécimen dans sa globalité, en 3D